Бизнес и финансы

В наших экспериментах добавление в инкубационную среду лиопротеинов или циклодекстрина делало невозможным нормальное быстрое перераспределение холестерина (и фосфолипидов) в срезах, потому что холестерин оказывался связанным с экспериментальными внешними акцепторами и таким образом исключался из нормальных биохимических механизмов в ткани гиппокампа. Это было тщательно подтверждено биохимическими и гистохимическими методами.

На таких препаратах были изучены два упомянутых выше электрофизиологических параметра: парное усиление и долгосрочная потенциация, отражающие эффективность нейротрансмиссии и синаптической пластичности соответственно. Так вот, при экспериментальном «отлучении» холестерина и фосфолипидов от нейронов гиппокампа оба параметра оказались нарушенными! А это значит, что свободный доступ к ткани мозга холестерину и фосфолипидам липопротеинов — необходимое условие для работы механизмов памяти.

Во-вторых, мы попытались выяснить, что происходит с синтезом липидов после запуска синаптической пластичности в интактных срезах. Для этого после индукции долгосрочной потенциации мы проделали серию биохимических процедур. Сначала метаболически метили срезы, «предлагая» клеткам ацетат, углерод в котором был заменен на радиоактивный изотоп 14С (именно из ацетата синтезируются липиды, в том числе холестерин). Затем выделили из препарата липиды и разделили их хроматографическим методом. Кроме того, мы высушивали срезы на покровных стеклах и экспонировали их с фотопластинами в глубоком холоде. После проявления фотопластин мы увидели, что встраивание радиоактивной метки во вновь синтезированные липиды гиппокампа усиленно шло именно там, где мы вызывали долгосрочную потенциа-цию. А встраивалась она во вновь синтезированные липиды гиппокампа (в том числе, и холестерин).

Кроме того, мы использовали метаболическое мече-ние липидов в переживающих срезах мозга (так называют срезы мозга, поддерживаемые в жизнеспособном состоянии в пробирке), чтобы показать, что именно через
ПРОБЛЕМЫ И МЕТОДЫ НАУК
липопротеины нервные клетки гиппокампа опосредуют обмен и холестерина, и фосфолипидов. В этом случае мы выделяли липопротеины из среды, в которой инкубировались срезы, методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Именно во фракции очищенных липопротеинов мы и обнаруживали радиоактивную метку, а не в остальной толще центрифужного объема, где должны были бы плавать малые молекулы не встроенного в липиды радиоактивного предшественника.